الوصف
المقايسة المناعية المرتبطة بإنزيم الفبرونيل (ELISA)
دليل تعليمات المجموعة
هذه المجموعة للاستخدام البحثي فقط.
1 الغرض من الاستخدام:
تستخدم هذه المجموعة للكشف الكمي عن بقايا الفبرونيل في الأعلاف والأسماك والجمبري وأنسجة اللحوم (مثل الدجاج ولحم البقر ولحم الخنزير) والبيض والعسل والحليب والمصل والبول.
2 مبدأ تجريبي
تعتمد هذه المجموعة طريقة ELISA التنافسية. صفيحة ميكروويل مغلفة بمستضد فيبرونيل مقترن ، يتم إضافة معيار أو عينة فيبرونيل ، يتم تغليف الفبرونيل المجاني مسبقًا بمولد مضاد مقترن بالفبرونيل على شريط ميكروويل تنافس مع علامات إنزيم الأجسام المضادة المضادة للفبرونيل ، قم بتطوير اللون باستخدام ركيزة TMB ، قم بتغيير اللون من الأزرق إلى الأصفر بعد إضافة محلول الإيقاف ، استخدم قارئ صفيحة ميكروية للكشف عند الطول الموجي 450 نانومتر والامتصاص ومحتوى الفبرونيل في العينة متناسبًا عكسياً ، تم حساب محتوى الفبرونيل في العينة من المنحنى القياسي.
3 طقم التكوين
3.1 لوحة ELISA القابلة للفصل مع مستضد فيبرونيل المطلي مسبقًا: قطعة واحدة (12 بئر × 8 شرائح).
3.2 معيار فيبرونيل: 6 عبوات (1 مل / زجاجة) ، المحتويات هي: 0 جزء في البليون ، 0.1 جزء في البليون ، 0.3 جزء في البليون ، 0.9 جزء في البليون ، 2.7 جزء في البليون ، 8.1 جزء في البليون.
3.3 متقارن إنزيم الأجسام المضادة للفبرونيل: 1 زجاجة (6 مل).
3.4 محلول تطوير اللون أ: زجاجة واحدة (6 مل).
3.5 سائل تطوير اللون ب: 1 زجاجة (6 مل).
3.6 وقف الحل: 1 زجاجة (6 مل) ، 2 م حامض الكبريتيك.
3.7 مخفف العينة: زجاجة واحدة (10 × 6 مل) ، تستخدم لتخفيف العينة.
3.8 سائل غسيل مركز: 1 زجاجة (20 × 20 مل) ، تستخدم لغسيل الأطباق.
3.9 ورقة تعليمات واحدة.
4 مواد مطلوبة ولكنها غير متوفرة
4.1 المعدات
4.1.1 قارئ صفيحة ميكروسكوبية بطول موجة 450 نانومتر.
4.1.2 الكسارة.
4.1.3 اسطوانة القياس.
4.1.4 مذبذب.
4.1.5 قمع.
4.1.6 Whatman No 1 أو ورق ترشيح مكافئ. 4.1.7 الماصة المجهرية.
4.2 الكواشف
4.2.1 ماء منزوع الأيونات أو ماء مقطر.
4.2.2 الميثانول.
5 تخزين
5.1 يتم تخزين المجموعة في 2 ~ 8 ℃ ، لا تجمد
5.2 يجب إحكام غلق الألواح الدقيقة غير المستخدمة وتخزينها جافة
6 أمور تحتاج إلى اهتمام
6.1 يرجى قراءة التعليمات بعناية قبل استخدام المجموعة.
6.2 لا تستخدم مجموعات منتهية الصلاحية.
6.3 قبل استخدام المجموعة ، أعد الكواشف إلى درجة حرارة الغرفة (25 ± 2 درجة مئوية). يوصى بالعودة إلى درجة الحرارة لمدة ساعتين على الأقل.
6.4 يحتوي المنتج القياسي على فيبرونيل ، لذلك يجب توخي الحذر عند استخدامه ، ويجب ارتداء القفازات أثناء التشغيل.
6.5 يحتوي محلول التوقف على حامض الكبريتيك ، الذي يمنع حروق الجلد وتآكل الملابس أثناء الاستخدام.
6.6 لا يمكن خلط نصائح المعايير والعينات المختلفة ، وإلا ستتأثر نتائج الاختبار.
6.7 يجب عدم خلط الكواشف الموجودة في مجموعات أرقام الدُفعات المختلفة ؛ يجب عدم خلط النصائح المستخدمة للمعايير والعينات المختلفة ، وإلا ستؤثر على النتائج التجريبية.
6.8 يجب استخدام مخفف العينة في هذه المجموعة عند تخفيف العينة ، وإلا فإنه سيؤثر على نتائج التجربة
6.9 يجب تجنب الرغوة عند خلط الكواشف.
7 تحضير سائل العمل
7.1 محلول فيبرونيل القياسي: 0 جزء في البليون ، 0.1 جزء في البليون ، 0.3 جزء في البليون ، 0.9 جزء في البليون ، 2.7 جزء في البليون ، 8.1 جزء في البليون
7.2 سائل غسيل مركز: يخفف 1:20 (1 + 19) بالماء المقطر للاستخدام
7.3 عينة المخفف: يخفف 1:10 (1 + 9) بالماء المقطر للاستخدام
7.3 عامل مولد اللون: محجوز ، تجنب الضوء المباشر
7.4 حل وقف رد الفعل: جاهز للاستخدام
8 إجراءات معالجة العينات (يجب تشغيل العينات بدقة وفقًا للتعليمات أثناء عملية الاستخراج ، ويجب تخفيف عملية الاستخراج بدقة ، وإلا ستكون النتائج غير دقيقة ، يجب تخزين العينات في مكان بارد ومظلم وتبريدها)
8.1 خذ 10 جم من العينة المسحوقة وأضف 20 مل من محلول ميثانول 70٪
8.2 اهتز بقوة لمدة 3 دقائق
8.3 مرشح مع ورق الترشيح Whatman No 1
8.4 خذ 25 مايكرولتر من العينة المعالجة وأضف 25 ميكرولتر من المادة المخففة إلى بئر التفاعل (عامل تخفيف العينة هو 2)
9 خطوات للمقايسة المناعية الإنزيمية
9.1 تعليمات تجريبية
9.1.1 يرجى إعادة جميع الكواشف الموجودة خارج الصندوق بالكامل إلى درجة حرارة الغرفة (25 ± 2 درجة مئوية) قبل بدء التجربة لمدة ساعتين تقريبًا. بعد التسخين إلى درجة حرارة الغرفة (25 ± 2 ℃) ، أخرج الشرائط الصغيرة التي يسهل اختراقها ، وأغلق الشرائط الصغيرة التي يسهل اختراقها ، واحفظها على الفور عند 2 ~ 8
ملاحظة: تأكد من أن عودة درجة الحرارة كافية ، وإلا ستتأثر دقة الاكتشاف ودقته.
9.1.2 يرجى إعادة الكاشف إلى 2 ~ 8 للتخزين مباشرة بعد الاستخدام
9.1.3 يرجى عدم تغيير برنامج التحليل
9.1.4 يرجى استخدام ماصة دقيقة
9.1.5 بمجرد بدء العملية ، يرجى عدم مقاطعة أي برنامج
9.1.6 تعتمد إمكانية استنساخ نتائج ELISA بشكل كبير على إجراءات التشغيل ، يرجى العمل بدقة وفقًا للمتطلبات
9.1.7 من أجل تجنب التلوث المتبادل ، يجب ملء كل معيار وعينة بنصائح مختلفة
9.1.8 لا تدع طرف الماصة يلمس المحلول أو السطح الداخلي للميكروويل عند إضافة العينات
9.2 خطوات التحليل
9.2.1 الترقيم مقدمًا ، ووضع علامة على نقطة البيعition من B0 والمعايير والعينات ، يوصى بإجراء الكشف عن الثقب المزدوج
9.2.2 خذ العدد المطلوب من المسام الدقيقة (يمكن إزالة شرائط المسام الدقيقة) ، وأغلق الشرائط الزائدة وأعدها فورًا عند 2 ~ 8 للتخزين
9.2.3 عينة محلول تخفيف (10 ×) ، محلول غسيل مركز (20 ×) مخفف في محلول عمل (مخفف بالماء المقطر أو الماء منزوع الأيونات)
9.2.4 أضف 50 مايكرولتر 0.0 جزء في البليون من المحلول القياسي إلى البئر B0
9.2.5 أضف 50 مايكرولتر من المحلول القياسي لكل بئر قياسي
9.2.6 أضف 50 مايكرولتر من محلول العينة لكل عينة جيدًا
9.2.7 أضف 50 ميكرولتر من إنزيم مضاد الأجسام المضادة للفبرونيل المتقارن إلى جميع الآبار
9.2.8 رج لوح التفاعل برفق لبضع ثوان.
9.337 ℃ حمام دافئ لمدة 30 دقيقة (النقر على لوحة التفاعل من وقت لآخر أثناء الاستحمام الدافئ يمكن أن يقلل من خطأ الثقب المزدوج)
9.3.1 تخلص من السائل الموجود في الآبار ، واغسل الصفيحة المصغرة 5 مرات بالغسول ، واضغط على ورق ماص للمرة الأخيرة لإزالة السائل تمامًا من الآبار.
9.4 رد الفعل
9.4.1 بعد اكتمال إجراء الغسيل ، استخدم على الفور ماصة صغيرة لإضافة 50 ميكرولتر من محلول الكروموجين أ ثم 50 ميكرولتر من محلول الكروموجين ب لكل ميكروويل ؛ هز لوحة التفاعل قليلاً لخلطها جيدًا
9.4.237 ℃ حمام دافئ لمدة 10 دقائق
9.4.3 يضاف 50 مايكرولتر من محلول التوقف لكل بئر ويخلط جيدًا
9.4.4 كشف الامتصاص عند 450 نانومتر واقرأ النتيجة في غضون 5 دقائق.
10 نتيجة حساب
10.1 التحليل الكمي
10.1.1 متوسط القيمة (B) لقيمة الامتصاص لكل محلول معياري للتركيز والعينة التي تم الحصول عليها مقسومة على قيمة الامتصاص (B0) للمعيار الأول (0 قياسي) ومضروبة في 100٪ ، وهي نسبة الامتصاص .
B – متوسط قيمة الامتصاص للمحلول القياسي أو محلول العينة B0 – متوسط قيمة الامتصاص لمحلول قياسي 0ppb
10.1.2 استخدم القيمة اللوغاريتمية لتركيز الفبرونيل كمحور X وقيمة نسبة الامتصاص كمحور Y لرسم منحنى قياسي. وفقًا لقيمة الامتصاص المئوية للعينة ، يمكن الحصول على الإحداثي للنقطة المقابلة من المنحنى ، وهو لوغاريتم تركيز الفبرونيل ، والنقيض هو تركيز فيبرونيل C (جزء في البليون) في محلول القياس
10.1.3 نظرًا لأن العينة قد تم تخفيفها مسبقًا ، يجب ضرب تركيز العينة التي تم الحصول عليها من المنحنى القياسي في عامل التخفيف الخاص بها.
10.2 التحديد شبه الكمي
10.1.1 التحديد البصري شبه الكمي: أولاً ، حدد الحل المعياري المناسب وقم بتشغيله مع العينة ، وحدد ما إذا كانت قيمة تركيز العينة أقل أو أكبر من القيمة القياسية بناءً على مقارنة الألوان بين العينة والمعيار .
10.1.2 القياس شبه الكمي للأداة: حدد أولاً حلًا قياسيًا مناسبًا وقم بتشغيله مع العينة ، وحدد ما إذا كانت قيمة تركيز العينة أقل أو أكبر من القيمة القياسية بناءً على مقارنة قيم الامتصاص من العينة والمعيار.
11 خصوصية
مادة متصالبة فيبرونيل 100٪
12 مجموعة معلمات
الحد الأدنى لاكتشاف هذه المجموعة هو 0.05ppb. يجب أن تكون أفضل قيمة امتصاص لـ B0 أكبر من 1.0
الخطأ داخل لوحة امتصاص الطقم أقل من 8٪ ، والخطأ بين الألواح أقل من 15٪. معدل الاسترداد لطريقة استخراج عينة الأنسجة الواردة في هذا الدليل أكبر من 80٪. 13
نطاق المنحنى القياسي الذي توفره المجموعة هو 0.1ppb ~ 8.1ppb.
14 قيود التحليل
يجب تأكيد العينات التي تم اختبارها إيجابية بواسطة هذه المجموعة بطريقة أخرى مثل HPLC أو GC / MS.
